山东地方规范《维生素的同步快速测定 高效液相色谱法》

本标准适用于复合预混合饲料、维生素预混合饲料中维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E乙酸酯的测定。其他饲料可参照执行。  原理  试样中的维生素A乙酸酯、维生素D3和维生素E乙酸酯用二甲基亚砜(DMSO)超声溶解,经正己烷萃取、浓缩、复溶后,供高效液相色谱仪测定,外标法定量。      1、高效液相色谱仪:配有紫外或二极管阵列检测器。  2、电子天平:感量为0.1
mg和0.01
mg。  3、紫外分光光度计。  4、超声波振荡器。  5、振荡器:频率不低于250次/min。  6、旋转蒸发器。  7、氮吹仪。  8、平底烧瓶(具塞):棕色500
mL。  样品提取  平行做两份试验。称取试样1~3 g(准确至0.1
mg),置于500 mL平底烧瓶中,加30 mL的DMSO(4.3),在超声波水浴中超声提取30
min(水温不宜超过35度;中间旋摇2~3次以防样品附着瓶底);取出放置冷却。  液相色谱参考条件  色谱柱:C18,长250
mm,内径4.6 mm,粒径5 ?m,或性能相当者。  柱温:30 ℃;  进样量:10
μL;  流动相:甲醇+水=97+3;  流速:1.0
mL/min;  检测波长:维生素A乙酸酯 325 nm;维生素D3 264 nm;维生素E乙酸酯
285
nm。  精密度  在重复性条件下两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10
%。

乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的测定一.名词简介1.三聚氰胺理化性质三聚氰胺:英文名“melamine”,简称三胺,学名三氨三嗪,别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式:C3N6H6、C3N3(NH2)3;分子量:126.12;物理性能:白色结晶粉末,无毒,无味;相对密度:1570kg/m³;熔点:在常压下,354℃分解;升华温度:300℃;溶解性:能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶;微溶于水、乙醇;不溶于乙醚、苯和四氯化碳,水溶液呈弱碱性。化学性能:三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料,显弱碱性,能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐;在强酸或强碱液中,三聚氰胺发生水解,胺基逐步被羟基取代,生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸;三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物;三聚氰胺与甲醛反应制成树脂,三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料,防火耐热且有很高的稳定性,用于生产塑料、地板砖,厨房用具,防火纤维,商业滤膜,胶水和阻燃剂。2.乳制品是指以生鲜牛乳及其制品为主要原料,经加工而制成的各种食品。本标准所指的乳制品包括液体乳类、乳粉类、含乳饮料类、炼乳类、乳脂肪类、干酪类、乳冰淇淋类和其他乳制品类等。二.高效液相色谱法测定1.原理试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤得到测试液,经高效液相色谱测定,根据保留时间和紫外吸收光谱定性,根据峰面积进行定量。2试剂方法中所用试剂,除另有规定外,均为分析纯试剂,水为GB/T6682-2008中一级用水,溶液为水溶液。2.1磺基水杨酸。2.2柠檬酸。2.3辛烷磺酸钠:高效液相色谱离子对试剂。2.4乙腈:色谱纯。2.5盐酸。2.660g/L磺基水杨酸:称取60g磺基水杨酸用水定容至1L。2.70.1mol/L盐酸:量取8.3mL盐酸用水稀释至1L。2.8缓冲液:柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10mmol/L。2.9三聚氰胺标准品:已知含量大于99%。2.10标准储备液:称取三聚氰胺标准品0.01g,用甲醇配制成浓度为1mg/mL标准储备液。2.11标准系列:将标准储备液用0.1mol/L盐酸逐级稀释至0.25g/mL,0.50g/mL,1.00g/mL,2.00g/mL,4.00g/mL,5.00g/mL,10.0g/mL的系列标准溶液。3仪器成套性3.1高效液相色谱仪3.1.1P3000型高压输液泵3.1.2UV3000紫外检测器3.1.3Rehodyne手动进样阀(20μl)3.1.4CXTH3000色谱工作软件3.1.5ODS250mm×4.6mm,5m3.1.6分析启动工具包3.1.7溶剂托盘3.1.8试剂包3.1.9保护柱和柱芯3.1.10真空固相萃取装置3.2溶剂过滤器3.3超声波清洗器3.4柱温箱3.5高速离心机:转速》4000r/min3.6旋涡混匀器3.7分析天平:感量0.1mg4样品处理4.1固态乳制品称取1.0g左右试样,加入0.1mol/L盐酸约15mL,涡旋混匀,超声提取30min后加入60g/L磺基水杨酸6mL澳门蒲京赌场手机版,~8mL,用0.1mol/L盐酸定容至25mL,混匀后离心,上清液经0.45m的微孔滤膜过滤后进样。4.2液态乳制品称取15g左右试样,加入60g/L磺基水杨酸3mL~4mL,用0.1mol/L盐酸定容至25mL,混匀后离心,上清液经0.45m的微孔滤膜过滤后进样。4.3饲料称取1.0g左右试样,将样品用研钵充分碾碎混匀,加入0.1mol/L盐酸约15mL,涡旋混匀,超声提取30min后加入60g/L磺基水杨酸6mL~8mL,用0.1mol/L盐酸定容至25mL,混匀后离心,上清液经0.45m的微孔滤膜过滤后进样。5测定步骤5.1色谱条件5.1.1色谱柱:ODS或C8,250mm×4.6mm,5m。5.1.2流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15。5.1.3流速:1.0mL/min。5.1.4柱温:40℃。5.1.5波长:240nm。上述色谱条件是典型的,可根据实际情况做具体调整。如果分离效果不理想,将水相改为:柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10mmol/L,加3mL三氯乙酸,配制成1000mL溶液,流动相用氨水调PH值3.9到3.95。5.2测定5.2.1标准曲线制备将标准系列0.25g/mL,0.50g/mL,1.00g/mL,2.00g/mL,4.00g/mL,5.00g/mL,10.0g/mL分别进样20L,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标作图,制作标准曲线。5.2.2样品测定取制备好的试样溶液进样20L,进行液相色谱分析。根据保留时间和紫外吸收光谱定性,根据峰面积进行定量。三聚氰胺的标准样品色谱图见图1,液态奶样品色谱图见图2,奶粉样品色谱图见图3。图1标样色谱图仪器:山东金普分析仪器有限公司LC3000色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS柱250mm×4.6mm,5μm流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9流速:1.0mL/min柱温:40℃波长:240nm图2液态奶样品色谱图仪器:山东金普分析仪器有限公司LC3000色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS柱250mm×4.6mm,5μm流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9流速:1.0mL/min柱温:40℃波长:240nm图3奶粉样品色谱图仪器:山东金普分析仪器有限公司LC3000色谱柱:山东金普分析仪器有限公司ODS柱250mm×4.6mm,5μm流动相:缓冲液︰乙腈=85︰15,用三氯乙酸调PH3.9流速:1.0mL/min柱温:40℃波长:240nm6结果计算6.1计算试样中三聚氰胺的含量按式计算:C×VX=————………………………………………………m式中:X—样品中三聚氰胺含量,mg/kg;C—从标准曲线上查出的含量,g/mL;V—定容体积,mL;m—称样量,g。平行测定结果用算术平均值表示,结果保留三位有效数字。本文参考以下方法:HPLC-UV检测方法三聚氰胺在传统的C18柱上保留很